应用于食品，保健食品原料，药品原料，应用各种制剂剂型

灵芝提取物工艺研究：

[药材来源]

本品为多孔菌科真菌赤芝ganodermalucidum（leyss.exfr.）karat，或紫芝g.sinensezhaoxuetzhang的干燥子实体。全年采收，除去杂质，剪除附有朽木、泥沙或培养基质的下端菌柄，阴干或40℃-50℃烘干。灵芝分布于华东、西南及河北、山西、台湾、河南、广东、海南、广西、贵州。紫芝分布于河北、山东、浙江、江西、福建、台湾、湖南、广东、贵州，现多为栽培。

[药材质量]

1.灵芝中不同部位灵芝酸b的含量比较（1）

赤芝菌盖：菌盖表皮层0.56mg/g，木栓层0.19mg/g，菌柄0.29mg/g，菌盖子实体全部0.53mg/g，孢子粉0.087mg/g，赤芝发酵菌丝体未检出，紫芝菌盖极微量。

[产品规格]

1、灵芝提取物灵芝多糖的含量要求为5%、10%、15%、40%。（uv检测）

2、灵芝提取物灵芝酸的含量要求为4%、8%。（hplc检测）

[主要成分]

灵芝中的化学组成比较复杂，已报道的化学成分有150余种，其中子实体主要含有三萜类、甾类、氨基酸、多肽糖、香豆精苷、挥发油、油脂、生物碱及矿物元素。干的灵芝子实体含12%-13%水分，54%-56%纤维素，13-14%木脂素、1.9%-2%、1.6%-2.1%总氮，4%-5%还原物质，0.14%-0.16%甾类，0.08%-0.12%总酚和0.022%灰分。

1.三萜类

灵芝酸a、b、c、d、f（ganodericacida、b、c、d、f），从赤芝孢子粉酸性脂溶部分分离到8个三萜化合物，5个四环三萜酸，1个四环三萜醇，2个五环三萜内酯，分别为灵芝酸a（gonosporericacida），灵芝酸b、c、d、m，灵芝酮三醇（ganodermonotrid），灵芝孢子内酯a、b（ganosporelactonea、b）。

2.多糖、氨基酸肽及其他

灵芝多糖主要存在于灵芝细胞内壁，大部分为β-葡聚糖，少数α-葡聚糖，相对分子质量从数百到数十万，除少量的小分子多糖外，大多不溶于高浓度乙醇，溶于热水。灵芝多糖的组成除含有葡萄糖外，大多还含有少量阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、鼠李糖、半乳糖和甘露糖等，部分多糖含有肽链，含肽链的多糖活性比较高。

3.核苷、甾醇、生物碱与呋喃

核苷类是一类具有广泛的生理活性的水溶性成分，分别是尿嘧啶、尿嘧啶核苷、腺嘌呤、腺嘌呤核苷、灵芝嘌呤。

灵芝中甾醇有近20种，含量较高，其骨架分为麦角甾醇类和甾醇两种类型，即麦角甾醇等。

灵芝中生物碱的含量较低，胆碱、甜菜碱极其盐酸盐、灵芝碱甲、（gahoine）、灵芝碱乙（ganodine）。

[提取工艺]

1.灵芝多糖的提取

取灵芝5kg，洗去泥土，切成碎块，回流提3次，合并3次提取液过滤，滤液减压浓缩

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后加入乙醇，使含醇量达到80%，放置12h，离心，收集沉淀，加蒸馏水溶解煮沸，趁热滤除不溶物，滤液在搅拌下再加入乙醇，使含醇量达到80%，放置析出灰紫色沉淀，低温干燥，即得灵芝多糖粗品，收率约0.55%左右。将粗品溶于蒸馏水中，在搅拌下加入鞣酸溶液，煮沸15min，加入活性炭，趁热滤过，滤液放冷。加入乙醇使含醇量达到70%，静止24h，滤取析出物，用70%乙醇反复洗涤沉淀，再用蒸馏水连续洗脱溶解，洗出液浓缩，加入乙醇使含醇量达到70%，放置滤取沉淀于低温干燥，即得灵芝多糖。灵芝水提取收率3.5%、4.3%、5.6%。

2.灵芝孢子油的提取

灵芝破壁孢子粉，用无水乙醇700c回流提取3次，40-500c减压回收，得油状物。用干燥剂除去水分。除去水分和单糖。

3.灵芝孢子酶破壁法（2）

孢子粉100g，用95%乙醇浸泡3d，滤去乙醇，加10%乙醇10倍量，及纤维素酶水解24h，再加中性蛋白酶于550c水解24h，再加酸性蛋白酶调ph=4.0，水解24h，灭酶滤过，用适量水洗，干燥，研粉得98g，收率为：97.5%。

孢子多糖的提取率，未破壁：1.13%；机械破壁：1.16%；酶法破壁：2.14%。

4.醇提水沉法

该法为先用乙醇提取，在提取液中加入水出现沉淀，取滤液浓缩后即为灵芝浸膏。

4.1原料处理：取干燥合格的灵芝子实体切碎粉碎备用。

4.2乙醇回流提取：将粉碎的灵芝用50%医用酒精湿润后，投入具夹层的反应罐中，再加入50%乙醇，以浸没生药为度。夹层加热回流2h，密闭2h时，放出次回流液。同法用60%及70%乙醇回流提取2次。

4.3回收乙醇：将三次回流液合并，静止48h，轻取上清液减压回收乙醇。浓缩至每毫升含1g生药量。

4.4醇沉：在上述浓缩液中缓缓加入95%乙醇，不断搅拌，使含醇量达70%，室温静置24h以上，待沉淀完全后轻取上清液。减压回收乙醇，浓缩至每毫升含2g生药。

4.5水沉：在以上浓缩液中缓缓加入等量新鲜热蒸馏水（70℃）和0.5%苯甲酸钠，不断搅拌，使之充分混合溶解，3～5℃下静置48h以上，待沉淀完全，过滤至滤液澄明，即得每毫升含1g生药量浓缩液，备用。减压浓缩即成浸膏。

5.水提醇沉法

5.1原料处理：同上法。

5.2水提取：将粉碎之灵芝，加水湿润约0.5h，置具夹层反应罐中，加水浸没生药为度，夹层通入蒸汽加热至沸，水提2h，密闭2h，放出水提液。药渣同法进行第二次水提。

5.3浓缩：将二次水提液合并，置反应罐中浓缩至每毫升含1g生药。

5.4醇沉：在以上浓缩液中缓缓加入95%乙醇，不断搅拌，使含醇量达70%，静24h以上，待沉淀完全，轻取上清液，减压回收乙醇，浓缩至每毫升含2g生药。

5.5水沉：在以上浓缩液中缓缓加入等量70℃热蒸馏水，并加入0.5%苯甲酸钠，不断搅拌，使其充分混合溶解，置3～5℃温度下，静置48h以上，待沉淀完全，过滤至澄明，即得每ml含1g灵芝的浓缩液。减压浓缩后即得灵芝浸膏。

6.渗滤提取法

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6.1原料处理：同上法。

6.2装缸及渗滤：在渗滤缸底放一层具孔隔板，上放4层纱布或尼龙布。将粉碎后的灵芝用40%医用酒精湿润0.5h后装入缸内，装药量为缸体积的2/3，上压重物。加入40%的乙醇量达生药量的5倍时，改加50%乙醇，加量为生药量9倍。渗滤时间约10d。

6.3回收浓缩：将渗滤液合并，采用减压回收装置回收酒精，浓缩至每毫升含1g生药。

6.4醇沉：同醇提水沉法。

6.5水沉：同醇提水沉法。

深层发酵培养得到的灵芝菌丝体亦可用以上三种方法制备灵芝浸膏。

灵芝浸膏是灵芝中即溶于醇又溶于水的成分，是粗提取物，可进一步提取纯化成精细产品。

四、灵芝提取物的生产设备：